Визуализация живых клеток требует микроскоповЭто минимизирует фототоксичность, поддерживает жизнеспособность клеток и обеспечивает визуализацию высокого разрешения с течением времени. Общий выбор включает в себя:
1. Инвертированные флуоресцентные микроскопы:
Широкие микроскопы: оснащены контролем окружающей среды (температура, CO₂, влажность) и чувствительными камерами (например, SCMO). Часто в сочетании с фазовой контрастной или DIC (дифференциальная интерференционная контрастность) для визуализации без меток.
Спиннирующий диск Конфокал: уменьшает фотообеспеленное с помощью более быстрого сканирования по сравнению с традиционным лазерным сканирующим конфокалом. Идеально подходит для динамических процессов.
2. Световая флуоресцентная микроскопия (LSFM):
Освещает только фокальную плоскость, резко уменьшая воздействие света и обеспечивая долгосрочную визуализацию (например, от часов до дня).
3. Двухфотонная микроскопия:
Использует ближний инфракрасный свет для более глубокого проникновения тканей и снижения фототоксичности, подходящей для толстых образцов, таких как 3D-культуры.
4. TIRF (общая флуоресценция внутреннего отражения):
Визуализирует события вклеточная мембрана(например, транспортировка везикул) путем визуализации тонкого (~ 100 нм) оптического сечения.
5. Микроскопы супер-разрешения (например, Sted, SIM):
Достичь более высокого разрешения, но требуют тщательной оптимизации, чтобы сбалансировать воздействие света и здоровье клеток.
6. Системы, оптимизированные в прямом эфире:
Включите экологические камеры, адаптивную оптику и детекторы с низким освещением (например, камеры EM-CCD).
Ключевые особенности для живой визуализации:
- Контроль окружающей среды: поддерживает температуру, Co₂ и влажность.
- Быстрое получение: минимизирует размытие движения для динамических процессов.
- Низкая фототоксичность: фильтры, источники светодиодного света или освещение света уменьшают повреждение.
Выберите на основе потребностей разрешения, продолжительности визуализации и чувствительности образца.
